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    彗星實驗

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    彗星實驗

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    單細(xì)胞凝膠電泳是檢測DNA損傷快速、簡便、敏感、經(jīng)濟的方法,因其細(xì)胞電泳形狀頗似彗星,又稱彗星試驗(cometassay)。

    技術(shù)原理:基于有核細(xì)胞的DNA分子量很大,在DNA超螺旋結(jié)構(gòu)附著在核基質(zhì)中,用瓊脂糖凝膠電泳將細(xì)胞包埋在載玻片上,在細(xì)胞裂解液作用下,細(xì)胞膜、核膜及其他生物膜破壞,使細(xì)胞內(nèi)的RNA、蛋白質(zhì)及其他成分進入凝膠,繼而擴散到裂解液中,唯獨核DNA仍保持纏繞的環(huán)區(qū)附著在剩余的核骨架上,并留在原位。如果細(xì)胞未受損傷,電泳中核DNA因其分子量大而停留在核基質(zhì)中,經(jīng)熒光染色后呈現(xiàn)圓形的熒光團,無拖尾現(xiàn)象。若細(xì)胞受損,在堿性電泳液(PH>13中),先是DNA雙鏈解螺旋且堿變性為單鏈,單鏈斷裂的碎片分子量小即可進入凝膠中,在電泳時斷鏈或碎片離開DNA向陽極遷移,形成拖尾。細(xì)胞核DNA損傷損傷愈重,產(chǎn)生的斷鏈或堿易變性片段就愈多,其斷鏈或短片也就愈小,在電場作用下遷移的DNA量多,遷移的距離長,表現(xiàn)為尾長增加和尾部熒光強度增強。因此,通過測定DNA遷移部分的光密度或遷移長度就可定量測定單個細(xì)胞DNA損傷程度。目前用于彗星試驗的細(xì)胞主要有兩大類:原位生物細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞。

    樣品要求

    1、細(xì)胞樣本:每個檢測樣本需提供5*10^5細(xì)胞量。

    2、新鮮組織樣本:需要24h內(nèi),4℃運輸?shù)竭_實驗室。

    項目案例

    彗星實驗

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