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當(dāng)前位置：生物測試 ? 顯微成像 ?

負(fù)染色技術(shù)

98%

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負(fù)染色技術(shù)

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項(xiàng)目介紹

生物透射電鏡介紹：透射電鏡，即透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope，簡稱 TEM），是一種最高分辨率可達(dá)到0.1-0.2納米的顯微鏡，是觀察和研究超微結(jié)構(gòu)的重要工具。在生物科學(xué)研究方面，透射電鏡可用來觀察細(xì)胞整體結(jié)構(gòu)、細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，包括（植物）細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核和各種細(xì)胞器的變化、外源物質(zhì)（如病原微生物、各種納米顆粒）與細(xì)胞的關(guān)系，如外源物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的方式、在細(xì)胞內(nèi)的分布情況、細(xì)胞對外界刺激的反應(yīng)（包括自噬、凋亡、壞死等）。

預(yù)約前請務(wù)必閱讀

前處理方法：

您需要提供的樣品：收集細(xì)胞/組織取樣（新鮮迅速取材），置于1.5ml尖底離心管內(nèi)，加入預(yù)冷的終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛固定液（固定液加到?離心管，使樣品完全浸沒在固定液中），放置于4℃過夜，請不要倒棄固定液，一般固定12h或過夜后可寄送。

具體取材及固定方法如下：

1.對于細(xì)胞類^{，106以上的細(xì)胞，用新鮮的培養(yǎng)液興奮細(xì)胞，用細(xì)胞刮刀刮下來或者酶消化，加入預(yù)冷的}終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液，固定半小時，1500-3000轉(zhuǎn)離心，5-10min，收集細(xì)胞于管底肉眼可見黃豆或者綠豆粒大小，棄上清，沿管壁緩慢加入4℃新的固定液，然后放入4°C冰箱過夜。

2.對于組織類，新鮮取材，取材位置準(zhǔn)確，組織大小盡量在1-2mm3（長1-5mm×寬1mm×高1mm），離體取材后請盡快投入4℃預(yù)冷的固定液中，然后放入4°C冰箱固定過夜。

3.對于細(xì)菌類，吸取OD0.5-0.8的培養(yǎng)物，加入預(yù)冷的終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液，固定半小時，3000-5000轉(zhuǎn)離心，5-10min，離心后棄上清，收集菌體沉淀于管底黃豆大小，可以用預(yù)冷的pH7.2的PB洗1-2次，棄上清，沿管壁緩慢加入新的4℃預(yù)冷的固定液，然后放入4°C冰箱過夜。

樣本編號建議按照字母或數(shù)字來，標(biāo)記清晰，樣本量充足。

*固定液的量請參考上圖，加至箭頭所示位置，細(xì)胞、細(xì)菌、真菌樣品用尖底離心管

*如為其他特殊樣品，需要特殊的固定方式和前處理方式，請與工作人員溝通確認(rèn)。

樣品要求

1.不需要稀釋的液體樣品需要準(zhǔn)備0.3毫升以上，最好1毫升，用2毫升左右ep管裝并封口膠封好口；注明樣品成分和類型，預(yù)期形貌和尺寸；一般會拍攝10張左右的照片；

2.默認(rèn)染色制樣方式：取10微升液體滴銅網(wǎng)，用1%磷鎢酸(或飽和醋酸鈾)染色制樣并清洗，室溫干燥制樣后放置一個小時以上；細(xì)菌、真菌、病毒、外泌體、細(xì)胞、脂類、膠束、蛋白默認(rèn)吸附5到10分鐘，染色1分鐘，不超聲也不稀釋；超聲可能會改變樣品的形態(tài)，樣品濃度很難用肉眼判斷，若需要超聲和稀釋，請訂單中明確；

3.染色制樣結(jié)果受樣品純度和濃度的影響較大，若樣品中含有較多的有機(jī)鹽和雜質(zhì)，染色效果一般較差；

4.病毒、外泌體需要濃縮，50微升以上；

5.該項(xiàng)目不支持回收，請自行留樣；

6.一般送樣方式為4℃冷藏，冷凍送樣需要在訂單中特別指明（比如外泌體和病毒樣品）；上門取樣樣品，樣品如需冷藏，請一定準(zhǔn)備冰塊或干冰和泡沫箱；

7. 細(xì)菌和病毒等需要滅活處理，有傳染性的樣品不做測試；

8. 注明圖片標(biāo)尺和對應(yīng)的圖片張數(shù)，數(shù)量不超過10張。如未注明，不接受因標(biāo)尺問題導(dǎo)致的免費(fèi)補(bǔ)拍或重拍（標(biāo)尺100nm是儀器的極限，通常拍出的樣品分辨率低，不建議選擇該標(biāo)尺）。我們盡量會找您預(yù)期的圖片形貌，但是最終以實(shí)際形貌為準(zhǔn)。

項(xiàng)目案例