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              Document

              當前位置:生物測試 ?  顯微成像 ? 

              負染色技術

              98%

              滿意度

              負染色技術

              已 預 約:

              8841次

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              項目介紹

              生物透射電鏡介紹:透射電鏡,即透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡稱 TEM),是一種最高分辨率可達到0.1-0.2納米的顯微鏡,是觀察和研究超微結構的重要工具。在生物科學研究方面,透射電鏡可用來觀察細胞整體結構、細胞亞細胞結構,包括(植物)細胞壁、細胞膜、細胞核和各種細胞器的變化、外源物質(如病原微生物、各種納米顆粒)與細胞的關系,如外源物質進入細胞內部的方式、在細胞內的分布情況、細胞對外界刺激的反應(包括自噬、凋亡、壞死等)。

              預約前請務必閱讀

              前處理方法:

              您需要提供的樣品:收集細胞/組織取樣(新鮮迅速取材),置于1.5ml尖底離心管內,加入預冷的終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛固定液(固定液加到?離心管,使樣品完全浸沒在固定液中),放置于4℃過夜,請不要倒棄固定液,一般固定12h或過夜后可寄送。

              具體取材及固定方法如下:

              1.對于細胞類,106以上的細胞,用新鮮的培養液興奮細胞,用細胞刮刀刮下來或者酶消化,加入預冷的終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液,固定半小時,1500-3000轉離心,5-10min,收集細胞于管底肉眼可見黃豆或者綠豆粒大小,棄上清,沿管壁緩慢加入4℃新的固定液,然后放入4°C冰箱過夜。

              2.對于組織類,新鮮取材,取材位置準確,組織大小盡量在1-2mm3(長1-5mm×寬1mm×高1mm),離體取材后請盡快投入4℃預冷的固定液中,然后放入4°C冰箱固定過夜。

              3.對于細菌類,吸取OD0.5-0.8的培養物,加入預冷的終濃度為2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液,固定半小時,3000-5000轉離心,5-10min,離心后棄上清,收集菌體沉淀于管底黃豆大小,可以用預冷的pH7.2的PB洗1-2次,棄上清,沿管壁緩慢加入新的4℃預冷的固定液,然后放入4°C冰箱過夜。

              樣本編號建議按照字母或數字來,標記清晰,樣本量充足。

              *固定液的量請參考上圖,加至箭頭所示位置,細胞、細菌、真菌樣品用尖底離心管

              *如為其他特殊樣品,需要特殊的固定方式和前處理方式,請與工作人員溝通確認。

              樣品要求

              1.不需要稀釋的液體樣品需要準備0.3毫升以上,最好1毫升,用2毫升左右ep管裝并封口膠封好口;注明樣品成分和類型,預期形貌和尺寸;一般會拍攝10張左右的照片;

              2.默認染色制樣方式:取10微升液體滴銅網,用1%磷鎢酸(或飽和醋酸鈾)染色制樣并清洗,室溫干燥制樣后放置一個小時以上;細菌、真菌、病毒、外泌體、細胞、脂類、膠束、蛋白默認吸附5到10分鐘,染色1分鐘,不超聲也不稀釋;超聲可能會改變樣品的形態,樣品濃度很難用肉眼判斷,若需要超聲和稀釋,請訂單中明確;

              3.染色制樣結果受樣品純度和濃度的影響較大,若樣品中含有較多的有機鹽和雜質,染色效果一般較差;

              4.病毒、外泌體需要濃縮,50微升以上;

              5.該項目不支持回收,請自行留樣;

              6.一般送樣方式為4℃冷藏,冷凍送樣需要在訂單中特別指明(比如外泌體和病毒樣品);上門取樣樣品,樣品如需冷藏,請一定準備冰塊或干冰和泡沫箱;

              7. 細菌和病毒等需要滅活處理,有傳染性的樣品不做測試;

              8. 注明圖片標尺和對應的圖片張數,數量不超過10張。如未注明,不接受因標尺問題導致的免費補拍或重拍(標尺100nm是儀器的極限,通常拍出的樣品分辨率低,不建議選擇該標尺)。我們盡量會找您預期的圖片形貌,但是最終以實際形貌為準。

              項目案例

              常見問題
              1、低壓的范圍是?

              80-120kv

              2、哪些樣品一般需要負染?

              觀察形貌的生物和有機類,如細菌、病毒、膠束等。

              3、染色劑有哪些?

              磷鎢酸、醋酸鈾。

              4、低壓可以拍高分辨嗎?

              不能,因為電壓低,能量小,分辨率達不到要求。

              5、送樣方式?

              易變質的需要低溫冷藏,病毒、外泌體需要濃縮并冷凍。

              負染色技術

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