預存
                
                

                                
                
                            
              
        
              
        
              
            
              
                
            
              


            
              
                
              
                    
              
                        
                    
              
                
              
            
              

        
              
    
              













    
    
    
    Document
    
    



    
              當前位置：文庫百科 ? 文章詳情
              
    
              
        
              

            
              
                
              
                    
              實驗筆記丨免疫組織化學染色（IHC）步驟詳解
              
                    
              
                        來源：
                        時間：2022-11-02 15:34:07
                        瀏覽：3326次
                    
              
                    
              

                    

                
              
                
              免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質）。

              包埋組織

              在４％多聚甲醛溶液中固定組織48小時后，放入一次性組織包埋盒中脫水，浸蠟后包埋。

              修片

              修剪石蠟切片，直至將石蠟切片修到大部分組織在切面上。

              組化


              3.1 蠟塊制備
              將組織蠟塊提前泡到冰水混合物中使其變軟，將組織蠟塊放在切片機上切出５微米的切片，60°Ｃ烘片１小時。

              3.2 脫蠟
              １）將切片放到60°Ｃ烘箱中烘片４ｈ以上。
              ２）在二甲苯I里置入片子，持續0.5 h，再置于二甲苯II，依然持續0.5 h。

              3.3 水化
              １）通過酒精，浸泡切片，酒精濃度不一，分為７０％、８０％、９０％、９５％、１００％，各濃度浸泡時間也有所差異，前３個濃度都是各自浸泡２分鐘，后面兩個濃度分別浸泡5分鐘、10分鐘。
              ２）最后將片子放到雙蒸水中浸泡２min。

              3.4 組化
              １）封閉處理：選擇內源性過氧化物酶阻斷劑，處理時間為20 min。
              ２）用雙蒸水浸泡三次，單次時間5 min。
              ３）抗原修復：準備pH＝6.0的10 nM檸檬酸抗原修復液400-600 ml，把片子放到里面，用保鮮膜封住燒杯口防止沸騰溢出。之后放到微波爐中用高火加熱10 min。
              ４）加熱后用雙蒸水補齊液面，在微波爐中加熱40 min（中低火至解凍之間），每隔10 min用雙蒸水補齊液面。
              ５）修復結束后，放到室溫下，使其自然冷卻。
              ６）DDW清洗180＂之后，通過PBS清洗，３分鐘／次，進行三次。
              ７）通過一抗封閉，保持４°Ｃ，第二天進行溫度回升，為37°Ｃ，然后通過PBS清洗，持續５分鐘。
              ８）在其中添加反應增強液，然后孵育，室溫條件，持續20 min，再通過PBS清洗，３分鐘／次，進行三次。
              ９）加入增強酶標山羊抗小鼠／兔IgG聚合物，然后孵育，室溫條件，持續20 min，再通過PBS清洗，3分鐘／次，進行三次。
              1０）滴加DAB顯色液（現用現配、比例1:19），室溫孵育2-10 min（根據不同的抗體自行選擇染色時間）。用自來水輕輕沖洗掉。
              １１）復染：加蘇木精染色50 s。用DDW，3 min，PBS，５min X３次。
              １２）脫水：將片子依次浸泡到不同濃度的酒精梯度中：７０％，ｌｍｉｎ—８０％，ｌｍｉｎ—９０％，1 ｍｉｎ—９５％ Ｉ，５ｍｉｎ—９５％ II ，５ｍｉｎ—１００％Ｉ，５ｍｉｎ—１００％ II，５ｍｉｎ。
              １３）透明：利用二甲苯Ｉ、二甲苯 II 進行處理，每次處理持續20 min。
              １４）中性樹脂封片，中性樹脂，加蓋玻片(組織部位切勿殘留小氣泡)，自然晾干。
              來源：科研日精進
                              
                
                
                
              
                    
              
                        
              評論 / 文明上網理性發言
              
                        
              12條評論
              
                    
              
                    
                    
              
                        
              全部評論 / 我的評論
                        
              
                        
              最熱 /  最新
              
                    
              
                    
              
                    
              
                        
              
                        
              
                            
              
                                全部
                                3小時前
                                四川
                            
              
                            
              
                                文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
                            
              
                            
              
                                
              
                                    點贊12
                                
              
                                
              回復
              
                                
              全部
              
                            
              
                        
              
                    
              
                    
              
                        查看更多評論
                    
              
                
              
                
              
                    
              相關文章
              
                    
              
                        
              
                                
              基礎理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結構）
              
                                
              2020-05-03
              
                            
              
                                
              晶體結構可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）
              
                                
              2021-01-22
              
                            
              
                                
              手把手教你用ChemDraw 畫化學結構式：基礎篇
              
                                
              2021-06-19
              
                            
              
                                
              【科研干貨】電化學表征：循環伏安法詳解（上）
              
                                
              2019-10-25
              
                            
              
                                
              【科研干貨】電化學表征：循環伏安法詳解（下）
              
                                
              2019-10-25
              
                            
              
                                
              Zeta電位的基本理論、測試方法和應用
              
                                
              2020-08-24
              
                            
              
                    
              
                
              
            
              


        
              
        
              
                        
              
                
              
                    
              熱門文章/popular
              
                
              
                
              
                    
                    
              
                            
                            
              基礎理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結構）
              

                        
              
                            
                            
              晶體結構可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）
              

                        
              
                            
                            
              手把手教你用ChemDraw 畫化學結構式：基礎篇
              

                        
              
                            
                            
              【科研干貨】電化學表征：循環伏安法詳解（上）
              

                        
              
                            
                            
              電化學實驗基礎之電化學工作站篇 （二）三電極和兩電極體系的搭建 和測試
              

                        
              
                            
                            
              【科研干貨】電化學表征：循環伏安法詳解（下）
              

                        
              

                
              
            
              
        
              
    
              
    
              
        
              
            
              
        
              
        微信掃碼分享文章
    
              







    
    
    
    
    



    


亚洲A丁香五香天堂网|
久久亚洲成a人片|
亚洲国产精品尤物YW在线观看|
国产A在亚洲线播放|
亚洲爆乳无码专区www|
亚洲福利一区二区三区|
亚洲欧洲在线观看|
亚洲第一区精品观看|
色欲aⅴ亚洲情无码AV|
亚洲av午夜电影在线观看|
亚洲精品女同中文字幕|
亚洲中文字幕无码中文字|
亚洲日韩av无码中文|
亚洲中文字幕无码mv|
亚洲1区1区3区4区产品乱码芒果|
亚洲精品视频在线|
亚洲天天在线日亚洲洲精|
亚洲精品自在在线观看|
精品亚洲永久免费精品|
亚洲成Av人片乱码色午夜|
亚洲狠狠婷婷综合久久久久
|
亚洲欧洲日韩国产综合在线二区|
久久精品国产亚洲AV麻豆王友容
|
亚洲熟妇中文字幕五十中出|
中文字幕亚洲综合久久菠萝蜜
|
亚洲国产成a人v在线|
亚洲videos|
中文字幕亚洲情99在线|
亚洲国产精品久久久久秋霞小|
亚洲AV无码片一区二区三区|
伊在人亚洲香蕉精品区麻豆|
亚洲精品国产精品乱码不卡|
国产成人亚洲综合无码|
亚洲精品乱码久久久久66|
久久亚洲精品成人综合|
亚洲国产美女视频|
四虎亚洲精品高清在线观看|
亚洲欧好州第一的日产suv|
国产天堂亚洲精品|
亚洲熟妇丰满多毛XXXX|
亚洲五月六月丁香激情|