預存
              Document
              當前位置:文庫百科 ? 文章詳情
              實時熒光定量PCR實驗中會出現的問題有哪些?
              來源:測試GO 時間:2022-10-28 11:34:10 瀏覽:4254次

              在科研人員進行實時熒光定量PCR的實驗操作中遇到了不計其數的問題,本文就給大家分享在實驗過程中出現頻率最高的一些問題:

               內參基因COL1(擴增曲線)

              一、Ct值出現

              檢測熒光信號的步驟有誤:一般SybrGreen法采用72℃延伸時采集,Taqman法則一般在退火結束時或延伸結束采集信號。

              1、引物或探針降解:可通過PAGE電泳檢測其完整性。

              2、模板量不足:對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起。

              3、模板降解:避免樣品制備中雜質的引入及反復凍融的情況。

              二、Ct值出現過晚(Ct>38

              1、擴增效率低:反應條件不夠優化。設計更好的引物或探針;改用三步法進行反應;適當降低退火溫度;增加鎂離子濃度等。

              2PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足。

              3PCR產物太長:一般采用80-150bp的產物長度。

              三、溶解曲線不止一個主峰

              1、引物設計不夠優化:應避免引物二聚體和發夾結構的出現。

              2、引物濃度不佳:適當降低引物的濃度,并注意上下游引物的濃度配比。

              3、鎂離子濃度過高:適當降低鎂離子濃度,或選擇更合適的mix試劑盒。

              4、模板有基因組的污染:RNA提取過程中避免基因組DNA的引入,或通過引物設計避免非特異擴增。

              四、擴增效率低

              1、反應試劑中部分成分特別是熒光染料降解。

              2、反應條件不夠優化:可適當降低退火溫度或改為三步擴增法。

              3、反應體系中有PCR反應抑制物:一般是加入模板時所引入,應先把模板適度稀釋,再加入反應體系中,減少抑制物的影響。


              測試狗文庫百科

              評論 / 文明上網理性發言
              12條評論
              全部評論 / 我的評論
              最熱 /  最新
              全部 3小時前 四川
              文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
              點贊12
              回復
              全部
              查看更多評論
              相關文章

              一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應用技術

              2023-10-08

              熱重分析(TG-DTG)曲線的幾種解析方法

              2023-12-26

              接觸角測試(CA)的原理、樣品制備要求及實際應用

              2023-11-16

              一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

              2023-11-23

              恒電流間歇滴定法GITT的基本原理以及測試教程

              2022-08-12

              TMA技術的基本概念、應用領域以及實際操作中的要點

              2023-12-06

              熱門文章/popular

              基礎理論丨一文了解XPS(概念、定性定量分析、分析方法、譜線結構)

              晶體結構可視化軟件 VESTA使用教程(下篇)

              手把手教你用ChemDraw 畫化學結構式:基礎篇

              【科研干貨】電化學表征:循環伏安法詳解(上)

              【科研干貨】電化學表征:循環伏安法詳解(下)

              電化學實驗基礎之電化學工作站篇 (二)三電極和兩電極體系的搭建 和測試

              微信掃碼分享文章
              久久久久亚洲精品男人的天堂| 亚洲精品国产av成拍色拍| 亚洲色欲色欲www| 亚洲亚洲人成综合网络| 亚洲av中文无码| 国产亚洲成在线播放va| 亚洲国产日韩a在线播放| 日韩亚洲产在线观看| 亚洲妇女水蜜桃av网网站| 97亚洲熟妇自偷自拍另类图片| 亚洲国产国产综合一区首页| 亚洲国产精品热久久| 亚洲国产一区二区三区青草影视| 亚洲精品成人av在线| 亚洲午夜久久影院| 日韩精品亚洲人成在线观看| 久久狠狠高潮亚洲精品| 亚洲精品美女久久久久9999| 亚洲人成激情在线播放| 亚洲日本va在线观看| 亚洲欧美成人一区二区三区| 亚洲国产成人久久精品软件| 日韩色日韩视频亚洲网站| 亚洲成片观看四虎永久| 亚洲综合色视频在线观看| 亚洲色偷偷综合亚洲AVYP| 国产精品亚洲玖玖玖在线观看| 亚洲无人区午夜福利码高清完整版| 久久91亚洲人成电影网站| 亚洲人成影院在线| 亚洲人成高清在线播放| 亚洲人成无码网站在线观看| 国产天堂亚洲国产碰碰| 中文字幕无码精品亚洲资源网| 亚洲国产精品一区二区第一页 | 亚洲s色大片在线观看| 久久精品国产亚洲av日韩| 亚洲中文久久精品无码1| 亚洲第一页日韩专区| 亚洲综合伊人久久大杳蕉| 亚洲欧洲第一a在线观看|