預存
              Document
              當前位置:文庫百科 ? 文章詳情
              如何進行冷凍切片檢測?步驟詳解
              來源: 時間:2024-12-16 10:14:43 瀏覽:1939次

              如何進行冷凍切片檢測?步驟詳解

               

              冷凍切片檢測是一種在病理學和生物科學研究中廣泛使用的技術,它允許快速制備組織樣本以進行形態學分析、免疫組化免疫熒光等實驗。

              以下是詳細的步驟介紹,包括從取材到分析的整個過程:

              1. 取材與速凍

              新鮮取材:迅速從生物體中獲取組織樣本,以減少死后變化對組織結構和抗原活性的影響。

              組織處理:將組織塊平放于特制容器內,如軟塑瓶蓋或小盒,直徑約2cm,對于小組織塊可加入OCTOptimal Cutting Temperature)包埋劑,以保持組織形態。

              速凍:使用液氮或干冰-丙酮混合物快速冷凍組織,確保組織迅速冰結成塊,減少冰晶損傷。

              2. 切片準備

              恒冷箱切片:將冷凍的組織塊置于切片機的冷凍臺上,調節至適宜溫度(-15℃至-20℃),使用專用刀片進行切片,厚度通常控制在4-10微米。

              組織貼片:切好的薄片需立即貼附在預冷的載玻片上,確保組織片的完整性和位置固定。

              3. 固定與處理

              固定:切片后,室溫晾干,然后用冷丙酮固定10分鐘,以穩定細胞結構和抗原。

              洗滌:用PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌3次,每次5分鐘,去除固定劑。

              抗原修復:對于某些需要抗原修復的實驗,將切片置于特定的修復液(如EDTA)中,通過微波或煮沸處理,恢復被固定劑封閉的抗原位點。

              4. 阻斷與封閉

              內源性酶抑制:使用3%過氧化氫溶液在室溫下避光孵育25分鐘,以減少內源性過氧化物酶的干擾。

              封閉:用BSA(牛血清白蛋白)或正常動物血清在組織周圍畫圈封閉,防止非特異性結合,室溫下封閉30分鐘。

              5. 抗體孵育

              一抗孵育:將切片置于含有適當稀釋的一抗的溶液中,4°C孵育過夜,以確保充分結合目標抗原。

              二抗結合:洗滌去除未結合的一抗后,加入標記的二抗(如HRP或熒光標記),室溫孵育一定時間。

              6. 顯色與染色

              DAB顯色或熒光染色:對于DAB顯色,經過二抗處理后,使用DAB試劑顯色,觀察到棕色沉淀即為陽性反應。對于熒光染色,直接觀察熒光信號。

              核染色:通常使用DAPI進行核染色,以提供細胞核的定位信息。

              7. 結果觀察與分析

              干燥與封片:切片干燥后,使用中性樹膠或其他封片劑封片,防止熒光淬滅。

              顯微鏡檢查:在熒光顯微鏡或光學顯微鏡下觀察,記錄圖像,分析抗原分布或細胞結構特征。

              注意事項

              溫度控制:整個過程中,特別是切片和固定步驟,溫度控制至關重要,以避免組織損傷和抗原損失。

              操作精細:每一步操作都需細致,避免組織片的損壞或抗原的非特異性結合。

              標準化流程:確保每一步的條件(如固定時間、抗體濃度)標準化,以提高實驗的可重復性。

              評論 / 文明上網理性發言
              12條評論
              全部評論 / 我的評論
              最熱 /  最新
              全部 3小時前 四川
              文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
              點贊12
              回復
              全部
              查看更多評論
              相關文章

              一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應用技術

              2023-10-08

              熱重分析(TG-DTG)曲線的幾種解析方法

              2023-12-26

              接觸角測試(CA)的原理、樣品制備要求及實際應用

              2023-11-16

              一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

              2023-11-23

              恒電流間歇滴定法GITT的基本原理以及測試教程

              2022-08-12

              TMA技術的基本概念、應用領域以及實際操作中的要點

              2023-12-06

              項目推薦/Project
              免疫組化(IHC)

              免疫組化(IHC)

              免疫熒光(IF)

              免疫熒光(IF)

              冷凍切片

              冷凍切片

              熱門文章/popular

              基礎理論丨一文了解XPS(概念、定性定量分析、分析方法、譜線結構)

              晶體結構可視化軟件 VESTA使用教程(下篇)

              手把手教你用ChemDraw 畫化學結構式:基礎篇

              【科研干貨】電化學表征:循環伏安法詳解(上)

              【科研干貨】電化學表征:循環伏安法詳解(下)

              電化學實驗基礎之電化學工作站篇 (二)三電極和兩電極體系的搭建 和測試

              微信掃碼分享文章
              亚洲AV电影院在线观看| 亚洲国产精品热久久| 国产啪亚洲国产精品无码| 亚洲欧美国产日韩av野草社区| 亚洲国产精品xo在线观看| 久久久综合亚洲色一区二区三区| 亚洲中文字幕无码中文字在线 | 久久夜色精品国产嚕嚕亚洲av| 伊人婷婷综合缴情亚洲五月| 亚洲欧洲精品成人久久曰影片 | 亚洲国产女人aaa毛片在线| 亚洲av无码成h人动漫无遮挡| 亚洲人成人一区二区三区| 狠狠综合久久综合88亚洲| 久久亚洲精品无码播放| 国产亚洲美女精品久久久| 国产亚洲精品成人a v小说| 亚洲一区AV无码少妇电影☆| 国产亚洲日韩一区二区三区| 国产亚洲人成网站在线观看| 337p日本欧洲亚洲大胆裸体艺术| 国产亚洲精品不卡在线| 国产亚洲成AV人片在线观黄桃| 久久久青草青青亚洲国产免观 | 亚洲va无码手机在线电影| 亚洲AV无码国产丝袜在线观看| 久久精品国产精品亚洲色婷婷| 亚洲激情中文字幕| 亚洲精品国产手机| 亚洲色欲色欲www| 亚洲字幕AV一区二区三区四区| 亚洲欧美国产国产综合一区| 国产成人亚洲精品播放器下载| 亚洲av区一区二区三| 国产成人精品日本亚洲专区 | wwwxxx亚洲| 久久亚洲精品11p| 亚洲毛片不卡av在线播放一区| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲AV综合色区无码一区| 亚洲美女aⅴ久久久91|