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              生物樣本透射電鏡測試的各類樣品制備方法
              
                    
              
                        來源：
                        時間：2024-11-05 10:52:15
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              生物樣本透射電鏡測試的各類樣品制備方法
               
              生物樣本透射電鏡（Transmission Electron Microscopy，簡稱TEM）是一種利用電子束穿透樣品進行成像和分析的顯微技術，具有極高的分辨率，能夠觀察到細胞結構、病毒、蛋白質等生物樣品的納米級細節；為了獲得高質量的TEM圖像，樣品的制備至關重要。
              一、概述
              透射電鏡樣品制備的基本目標是保持生物樣品的自然狀態，同時提高樣品的電子透明度，以便電子束能夠穿透并產生清晰的圖像；制備過程通常包括固定、脫水、滲透、包埋、切片、染色和安裝等步驟。
              二、樣品制備方法
              （一）固定
              固定是樣品制備的第一步，目的是迅速殺死細胞，并盡可能保持其生前狀態；常用的固定劑有戊二醛和鋨酸，戊二醛能快速穿透細胞，固定細胞質和細胞膜，而鋨酸則固定細胞核和細胞器。
              1. 戊二醛固定：將樣品置于2.5%的戊二醛溶液中，4℃下固定數小時至過夜。
              2. 鋨酸固定：戊二醛固定后，用鋨酸進行后固定，通常在4℃下進行1-2小時。
              （二）脫水
              脫水是為了去除細胞中的水分，以便后續的滲透和包埋。常用的脫水劑有乙醇和丙酮，濃度從30%逐漸增加到100%。
              （三）滲透
              滲透是將脫水劑替換為能與包埋劑相容的溶劑，如環氧樹脂，使包埋劑能夠滲透到細胞內部。
              （四）包埋
              包埋是將樣品嵌入到固體介質中，以便進行切片。常用的包埋劑有環氧樹脂、聚酯樹脂等。
              （五）切片
              切片是將包埋好的樣品切割成超薄（通常50-100納米）的切片，以供TEM觀察。切片方法有超薄切片和冷凍切片等。
              1. 超薄切片：使用超薄切片機，如萊卡UC6或鉆石刀，獲得超薄切片。
              2. 冷凍切片：在冷凍狀態下，使用冷凍切片機切割樣品。
              （六）染色
              染色是為了增強樣品的對比度，使其在TEM下更容易觀察。常用的染色劑有醋酸鈾、檸檬酸鉛等。
              （七）安裝
              將染色后的切片安裝在TEM專用的銅網或微柵上，準備進行TEM觀察。
              三、特殊樣品制備方法
              1. 細胞內特定結構的標記：對于需要觀察細胞內特定結構的情況，可以使用免疫金標記、免疫電子顯微鏡技術等對目標結構進行標記。
              2. 原位雜交：原位雜交技術可用于檢測細胞內特定的RNA或DNA序列，結合TEM技術，可以觀察到特定序列在細胞內的分布。
              3. 冷凍斷裂技術：冷凍斷裂技術適用于研究細胞膜的內部結構。樣品在冷凍狀態下斷裂，暴露出細胞膜的內部結構，然后進行TEM觀察。
              四、注意事項
              1. 在整個制備過程中，要盡量減少對樣品的損傷，保持其原始結構。
              2. 確保固定、脫水、滲透、包埋等步驟的試劑和設備清潔，避免污染。
              3. 切片時要保證切片的厚度均勻，以便獲得高質量的TEM圖像。
              4. 染色過程中要控制染色時間，避免過度染色。
                              
                
                
                
              
                    
              
                        
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                                四川
                            
              
                            
              
                                文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
                            
              
                            
              
                                
              
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