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染色技巧：HE染色的優(yōu)化與實(shí)踐

來源：時(shí)間：2024-07-10 09:38:28 瀏覽：4761次

染色技巧：HE染色的優(yōu)化與實(shí)踐

HE染色，即蘇木精-伊紅染色，是病理診斷中最為基礎(chǔ)和常用的染色方法之一。它通過染色劑蘇木精和伊紅對(duì)細(xì)胞的不同成分進(jìn)行著色，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)更加清晰可見，從而幫助病理醫(yī)生準(zhǔn)確診斷疾病。

一、原理

HE染色利用了蘇木精和伊紅兩種染料對(duì)細(xì)胞不同成分的親和力。蘇木精主要染色細(xì)胞核，使核結(jié)構(gòu)清晰可見；伊紅則染色細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)，使細(xì)胞質(zhì)和基質(zhì)對(duì)比鮮明；通過這種染色方式，病理醫(yī)生可以更加準(zhǔn)確地觀察和分析細(xì)胞形態(tài)變化，從而作出正確的診斷。

二、優(yōu)化技巧

1. 染色溫度的控制

染色溫度的控制是HE染色過程中的關(guān)鍵因素之一；適當(dāng)提高染色溫度可以加快染料進(jìn)入細(xì)胞的速度，提高染色效果，一般來說，蘇木精染液的染色溫度控制在37℃左右，伊紅染液的染色溫度控制在60℃左右為宜。

2. 染色時(shí)間的掌握

染色時(shí)間的掌握也是影響HE染色效果的重要因素；染色時(shí)間過短，細(xì)胞結(jié)構(gòu)染色不充分；染色時(shí)間過長(zhǎng)，則可能導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)過度染色，影響觀察；因此，根據(jù)細(xì)胞類型和染色目的，合理調(diào)整染色時(shí)間，是優(yōu)化HE染色的關(guān)鍵。

3. 染料濃度的調(diào)整

染料濃度的調(diào)整對(duì)HE染色的效果也有重要影響；適當(dāng)提高染料濃度可以增強(qiáng)染色效果，但過高的濃度可能導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)過度染色，影響觀察；因此，在實(shí)際操作中，需要根據(jù)細(xì)胞類型和染色目的，適當(dāng)調(diào)整染料濃度。

4. 緩沖液的選擇

緩沖液在HE染色過程中起到穩(wěn)定pH值和提供適當(dāng)環(huán)境的作用，選擇合適的緩沖液，可以保證染色過程的穩(wěn)定性和染色效果；常用的緩沖液有磷酸鹽緩沖液（PBS）和 Tris-HCl 緩沖液等。

三、實(shí)踐應(yīng)用

1. 樣本的固定與脫水

在HE染色前，首先需要對(duì)組織樣本進(jìn)行固定和脫水，固定可以保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)，脫水則使細(xì)胞更加易于染色；常用的固定劑有福爾馬林、卡諾氏固定劑等，脫水劑有酒精、乙酸乙酯等。

2. 透明化的處理

透明化是HE染色過程中的重要步驟，可以使樣本更加透明，便于染色劑滲透。常用的透明化劑有鹽酸、硫酸等。

3. 染色的操作

染色的操作需要遵循一定的順序和步驟；首先將蘇木精染液滴加到樣本上，輕輕蓋上蓋片，使染液均勻分布，然后將伊紅染液滴加到樣本上，同樣輕輕蓋上蓋片，使染液均勻分布，染色過程中，需要注意及時(shí)更換染液，以保證染色效果。

4. 洗滌與封片

染色完成后，需要用清水將多余的染料洗滌掉；然后用甘油或其他封片劑將樣本封片，以便于觀察和保存。

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