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HE染色實驗原理與步驟講解

來源：時間：2022-12-30 09:32:04 瀏覽：20662次

一、原理

蘇木精-伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining )，簡稱HE染色。HE染色是組織學、病理學教學與科研中最基礎、使用最廣泛的技術方法之一。

蘇木精染液為堿性，可以將組織的嗜堿性結構（如核糖體、細胞核及細胞質中的核糖核酸等）染成藍紫色；伊紅為酸性染料，可以將組織的嗜酸性結構（如細胞內及細胞間的蛋白質，包括路易體、酒精小體以及細胞質的大部分）染成粉紅色，使整個細胞組織的形態清晰可見。組織切片方法是教學、科研、病理檢驗工作中非常常用的一種試驗方法，HE染色則是在制作切片的過程中最常用的染色方法。

二、實驗標本

石蠟切片、冰凍切片

三、實驗試劑材料

多聚甲醛、酒精、二甲苯、石蠟、蘇木精水溶液、酒精伊紅染色液、生理鹽水、蒸餾水、PBS等實驗必備溶劑

四、實驗步驟

（1）樣本組織固定與切片：首先將組織樣本進行常規的石蠟包埋。在模具中加入液態石蠟，將待包埋的組織樣本放入石蠟中，確保組織位置規整。補充少許液態的石蠟后，進行降溫冷凍，使石蠟變為固態達到組織固定的效果，然后使用石蠟切片機進行切片，厚度在４-８um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。

（2）組織樣本脫蠟：將待測組織樣本切片放于二甲苯中，充分浸泡10min，浸泡完后更換二甲苯繼續浸泡10min，目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解，這樣可以在進行染液染色的時候，染液可以充分進入組織種，同時，二甲苯還可以起到透明的作用，使切片更容易觀察。

（3）組織樣本水化：將浸泡過二甲苯的待測組織樣本先放入無水乙醇中浸泡5min，使脫蠟時用的二甲苯可以被洗脫出去，使水可以進入組織中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡５min以達到充分水化的效果。

（4）組織切片蘇木素染色、分化與反藍：將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡５min，總共清洗３次。之后用移液槍吸取已經預先配制好的蘇木素染色液，每個組織切片滴加100ul，充分染色10min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進行分化，使細胞核中結合過多的染液和細胞漿中的多余的染液被除去。分化完成后，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。為了使蘇木素染藍色，使用弱堿性的促藍液加入組織切片中，讓細胞核染藍色。反藍結束后先用清水進行清洗，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。

（5）組織切片伊紅染色與脫水：向上一步驟的組織樣本切片中加入伊紅染液，并使組織可以充分染色3min，染色完畢后，再將組織切片進行梯度脫水，分別使用濃度為80%、95%以及無水乙醇進行操作。80%的乙醇脫水5s，95%乙醇脫水2min，無水乙醇脫水2min。

（6）組織樣本切片風干封片：將脫水后的組織樣本切片使用二甲苯浸泡２次，每次持續４min，然后將組織樣本切片干，并使用中性樹膠封片。

（7）最后在顯微鏡下觀察并拍照

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