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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)試樣品要求是什么？

來(lái)源：測(cè)試GO 時(shí)間：2022-11-03 10:10:41 瀏覽：2118次

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）：SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉–聚丙烯酰胺）凝膠電泳是一種可以根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量分離樣本中蛋白的技術(shù)。蛋白質(zhì)分子在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時(shí)，它的遷移率取決于所帶凈電荷及分子的大小和形狀等因素。如果在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中加入SDS和巰基乙醇，則蛋白質(zhì)分子的遷移率主要取決于它的分子量，而與所帶電荷和形狀無(wú)關(guān)。

樣品中靶標(biāo)蛋白表達(dá)量的變化

選擇一系列不同分子量的球形或基本呈球形的蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)物，使其形成SDS復(fù)合物。把這些復(fù)合物在相同條件下進(jìn)行電泳分離，分子量小的物質(zhì)泳動(dòng)距離大，分子量大的物質(zhì)泳動(dòng)距離小。測(cè)定出相對(duì)泳動(dòng)率，用相對(duì)泳動(dòng)率對(duì)蛋白質(zhì)的分子量的對(duì)數(shù)作圖，它們?cè)谝欢ǚ秶鷥?nèi)呈直線關(guān)系。因此可作為標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)檢測(cè)樣品蛋白質(zhì)的分子量。目前，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）主要應(yīng)用在蛋白質(zhì)分子量測(cè)定、特異性蛋白質(zhì)檢測(cè)、菌種鑒定等方面。

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳樣品要求：

1.檢測(cè)組織量要求為100mg（即黃豆大小）；

2.細(xì)胞量要求為10^6及以上，細(xì)胞收集方式—— 貼壁細(xì)胞：倒掉培養(yǎng)基，pbs清洗2-3次，用細(xì)胞刮收集細(xì)胞，2000g，離心5min，然后去掉上清液，細(xì)胞沉淀干冰運(yùn)輸；懸浮細(xì)胞：2000g，離心5min，然后收集細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸；

3.血液樣本：全血采用EDTA-抗凝管裝，至少1ml，4度運(yùn)輸，血清或白細(xì)胞采用干冰運(yùn)輸；

測(cè)試狗文庫(kù)百科

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